SARS-Cov-2 RNA उत्तरी इटालीको बर्गामोको कणमा भेटियो: पहिलो प्रारम्भिक प्रमाण

SARS-CoV-2 भाइरसको कारण - कोविड-19 रोग भनेर चिनिने गम्भीर तीव्र श्वसन सिन्ड्रोम - श्वासप्रश्वासका थोपाहरू र नजिकको सम्पर्कहरू मार्फत फैलिने मान्यता छ।COVID-19 को बोझ लोम्बार्डी र पो उपत्यका (उत्तरी इटाली) मा अत्यन्तै गम्भीर थियो, [२] कण पदार्थको उच्च सांद्रता द्वारा विशेषता भएको क्षेत्र, जुन पहिले नै मानव स्वास्थ्यमा नकारात्मक प्रभावहरू उत्पादन गर्न परिचित छ।अप्रिल १२ को मितिमा इटालीका लागि उपलब्ध क्षेत्रीय तथ्याङ्कले देखाउँछ कि हालको ३०% सकारात्मक व्यक्तिहरू अझै पनि लोम्बार्डीमा बस्छन् (करिब ४०% यदि महामारीको सुरुदेखि नै पुष्टि भएका समग्र केसहरूलाई विचार गर्दा), त्यसपछि इमिलिया रोमाग्ना (१३.५%) , Piedmont (10.5%), र भेनेटो (10%)।पो उपत्यकाका यी चार क्षेत्रहरूले इटालीमा रेकर्ड गरिएका कुल मृत्युको 80% र सघन हेरचाह एकाइहरू भर्नाको 65% हो।

हार्वर्ड स्कूल अफ पब्लिक हेल्थले गरेको अनुसन्धानले अमेरिकामा कोभिड-१९ को कारणले गर्दा पीएमको एकाग्रता र मृत्युदरमा भएको वृद्धिबीचको सम्बन्ध पुष्टि गरेको देखिन्छ। भाइरस संक्रमणको फैलावटको समयमा कण पदार्थ (पीएम) मा उपस्थित हुन सक्छ, [5,6] पहिले नै प्रमाण संग लगातार
अन्य भाइरसहरूका लागि उपलब्ध। PM मा SARS-CoV-2 को उपस्थिति पुष्टि वा बहिष्कार गर्दा।
यहाँ, हामीले फेब्रुअरी २१ देखि मार्चसम्म लगातार ३-हप्ताको अवधिमा दुई फरक हावा नमूनाहरूका साथ सङ्कलन गरेको बर्गामो प्रान्तको औद्योगिक साइटबाट हामीले बाहिरी/हवा बोक्ने PM10 को 34 PM10 नमूनाहरूमा प्रदर्शन गरेका विश्लेषणहरूको पहिलो नतिजा प्रस्तुत गर्दछौं। १३ औं।
Pan et al द्वारा वर्णन गरिएको पद्धति पछ्याउँदै।2019 मा (संकलन, कण आकार र वायुजनित भाइरसहरूको पत्ता लगाउनको लागि), [17] PM नमूनाहरू क्वार्ट्ज फाइबर फिल्टरहरूमा कम भोल्युम ग्रेभिमेट्रिक एयर नमूना प्रयोग गरेर सङ्कलन गरिएको थियो (38.3 l/min 23 h को लागि), सन्दर्भ विधि EN12341 सँग अनुरूप। : 2014 PM10 अनुगमनको लागि।कण 99.9% विशिष्ट संग फिल्टर मा फसेको थियोएरोसोल रिटेन्सन, ट्राइस्टे विश्वविद्यालयको एप्लाइड र तुलनात्मक जीनोमिक्सको प्रयोगशालामा राम्रोसँग भण्डारण गरी पठाइयो।नमूनाको "वातावरणीय" प्रकृतिलाई ध्यानमा राख्दै, सम्भवतः डीएनए पोलिमेरासेसको अवरोधकहरूमा धनी, हामीले फिल्टरको प्रकारमा अनुकूलित द्रुत आरएनए मल माटो माइक्रोब किट प्रयोग गरेर आरएनएको निकासीको साथ अगाडि बढ्यौं। [१८]आधा फिल्टर घुमाइएको थियो, माथिल्लो छेउ भित्रतिर फर्केर,5 मिलीलीटर पोलीप्रोपाइलीन ट्यूबमा, किटमा प्रदान गरिएको मोतीहरूसँगै।lysisbuffer को प्रारम्भिक 1 ml बाट, हामीले लगभग 400 ul समाधान प्राप्त गर्न सक्षम थियौं, जुन त्यसपछि मानक प्रोटोकल द्वारा परिभाषित गरिएको अनुसार प्रशोधन गरिएको थियो, परिणामस्वरूप 15 ul को अन्तिम एल्युएट हुन्छ।पछि, 5 ul SARS-CoV-2 परीक्षणको लागि प्रयोग गरियो।नमूना को विशेष मूल दिएर, qScript XLT 1-चरण RT-qPCR ToughMix प्रयोग गरिएको थियो। [19]प्रवर्द्धन प्रणालीहरू कोरमन एट अल द्वारा विकसित प्रोटोकलका थिए, WHO वेबसाइटमा प्रकाशित [२०]।
परीक्षण स्पष्ट रूपमा कण पदार्थमा SARS-CoV-2 RNA को उपस्थिति पुष्टि गर्न वा बहिष्कार गर्ने उद्देश्यले गरिएको थियो।पहिलो विश्लेषणले "E जीन" लाई आणविक मार्करको रूपमा प्रयोग गर्‍यो र 16 फिल्टरहरू मध्ये 15 मा प्रभावशाली सकारात्मक नतिजा उत्पादन गर्‍यो, यदि हामीले अपेक्षा गर्न सक्छौं भने, Ct 36-38 चक्रहरू बीचको थियो।
त्यस पछि, हामीले "RtDR जीन" लाई एक आणविक मार्करको रूपमा प्रयोग गरेर सकारात्मक फिल्टरहरू मध्ये ६ वटा ("E जीन" मा पहिले नै सकारात्मक) मा विश्लेषण दोहोर्याइसकेका छौं - जुन SARS-CoV-2 को लागि अत्यधिक विशिष्ट छ - 5 महत्त्वपूर्ण परिणामहरूमा पुग्यो। सकारात्मकता को;गलत सकारात्मकता बहिष्कार गर्न नियन्त्रण परीक्षणहरू पनि सफलतापूर्वक प्रदर्शन गरियो (चित्र 1)।
उपलब्ध दुर्लभ नमूना सामग्रीको अभावबाट बच्नको लागि, बाँकी निकालिएका आरएनएहरू स्थानीय विश्वविद्यालय अस्पताल (SARS-CoV-2 निदान परीक्षणहरूको लागि इटालियन सरकारले अधिकृत गरेको क्लिनिकल केन्द्रहरू मध्ये एक) मा डेलिभर गरियो। समानान्तर अन्धा परीक्षण।यो दोस्रो क्लिनिकल प्रयोगशालाले E, N र RdRP जीनहरूको लागि 34 RNA निष्कर्षणहरू परीक्षण गर्‍यो, कम्तिमा तीन मार्कर जीनहरूमध्ये एउटाको लागि 7 सकारात्मक नतिजाहरू रिपोर्ट गर्दै, तीनवटा मार्करहरू (चित्र 2) को लागि अलग-अलग पुष्टि भएको सकारात्मकताको साथ।नमूनाको प्रकृतिको कारण, र नमूना नैदानिक ​​​​निदान उद्देश्यका लागि नभई वातावरणीय प्रदूषण परीक्षणहरूका लागि गरिएको हो भन्ने कुरालाई ध्यानमा राख्दै (यसलाई पनि ध्यानमा राख्दै कि आणविक आनुवंशिक विश्लेषणहरू अघि कम्तिमा चार हप्तासम्म फिल्टरहरू भण्डारण गरिएको थियो।इटालियन शटडाउनको नतिजा), हामीले ८ फिल्टरहरूमा अत्यधिक विशिष्ट "RtDR जीन" पत्ता लगाएर SARS-CoV-2 भाइरल आरएनएको उपस्थिति उचित रूपमा देखाएको पुष्टि गर्न सक्छौं।यद्यपि, फिल्टरहरूबाट थप सामग्रीहरूको अभावको कारण, हामीले एकै साथ सबै 3 आणविक मार्करहरूको सकारात्मकता देखाउन पर्याप्त संख्यामा परीक्षणहरू दोहोर्याउन सकेनौं।
यो पहिलो प्रारम्भिक प्रमाण हो कि SARS-CoV-2 RNA बाहिरी कणहरूमा उपस्थित हुन सक्छ, यसैले सुझाव दिन्छ कि, वायुमण्डलीय स्थिरता र PM को उच्च सांद्रताको अवस्थामा, SARS-CoV-2 ले बाहिरी PM र - द्वारा क्लस्टरहरू सिर्जना गर्न सक्छ। तिनीहरूको प्रसार गुणांक घटाउँदै - वायुमण्डलमा भाइरसको निरन्तरता बढाउनुहोस्।यस प्रारम्भिक को थप पुष्टिप्रमाणहरू जारी छन्, र SARS-CoV-2 को जीवन्तताको बारेमा वास्तविक-समय मूल्याङ्कन र साथै कणहरूमा सोसिएको बेला यसको विषाणु समावेश गर्नुपर्छ।वर्तमानमा, PM मा भाइरसको उपस्थिति र कोभिड-१९ प्रकोप प्रगति बीचको सम्बन्धको बारेमा कुनै पनि अनुमान गर्न सकिँदैन।विशेष रूपमा सम्बोधन गर्न अन्य मुद्दाहरू पीएमको औसत सांद्रताहरू हुन्संक्रामकको सम्भावित "बूस्ट इफेक्ट" को लागि आवश्यक छ (यदि यो पुष्टि हुन्छ कि PM ले भाइरल ड्रपलेट न्यूक्लीको लागि "वाहक" को रूपमा काम गर्न सक्छ), वा PM को तल्लो थ्रेसहोल्डमा न्यूनतम खुराक एक्सपोजरको परिणामस्वरूप खोपको सैद्धान्तिक सम्भावना पनि। ।

Fig.1 E (A) र RdRP जीन (B) को एम्प्लीफिकेशन कर्भहरू: हरियो रेखाहरूले परीक्षण गरिएका फिल्टरहरू प्रतिनिधित्व गर्छन्;क्रस लाइनहरूसन्दर्भ फिल्टर निष्कर्षहरू प्रतिनिधित्व गर्दछ;रातो रेखाहरूले सकारात्मक नमूनाहरूको प्रवर्धन प्रतिनिधित्व गर्दछ।

चित्र २.सबै 34 PM10 नमूनाहरूको लागि E, N र RdRP जीनहरूका लागि सकारात्मक परिणामहरू (X द्वारा चिन्हित)दोस्रो समानान्तर विश्लेषणमा परीक्षण गरिएका फिल्टरहरू।
लियोनार्डो सेट्टी१, फेब्रिजियो पासारिनी२, जियानलुइगी डे गेनारो३, पियरलुइगी बार्बिरी४, मारिया ग्राजिया पेरोने५, मासिमो बोरेली६, जोलान्डा पाल्मिसानी३, एलेसिया डि गिलियो३, भ्यालेन्टिना टोरबोली६, अल्बर्टो पल्लाभिसिनी, मौरिजियो प्रिकोसियो, म्युरिजियो रसिया, ८८, एलेसिया डि गिलियो
1. विभाग औद्योगिक रसायन विज्ञान, बोलोग्ना विश्वविद्यालय, Viale del Risorgimento - 4, I-40136, बोलोग्ना, इटाली
e-mail: leonardo.setti@unibo.it
2. औद्योगिक अनुसन्धानका लागि अन्तरविभागीय केन्द्र "नवीकरणीय स्रोत, वातावरण, निलो वृद्धि, ऊर्जा",
University of Bologna, Rimini, Italy e-mail: fabrizio.passarini@unibo.it
3. जीवविज्ञान विभाग, बारी, बारी, इटालीको विश्वविद्यालय "एल्डो मोरो"
e-mail: gianluigi.degennaro@uniba.it; alessia.digilio@uniba.it; jolanda.palmisani@uniba.it
4. रसायन र औषधि विज्ञान विभाग, ट्राइस्टे विश्वविद्यालय, ट्रिएस्टे, इटाली
e-mail: barbierp@units.it
5. पर्यावरण अनुसन्धान डिभिजन, TCR TECORA, मिलान, इटाली
e-mail: mariagrazia.perrone@tcrtecora.com
6. जीवन विज्ञान विभाग - ट्राइस्टे विश्वविद्यालय, ट्रिएस्टे, इटाली
e-mail: borelli@units.it; torboli@units.it; pallavic@units.it
7. प्रयोगशाला मेडिसिनको डिभिजन, युनिभर्सिटी हस्पिटल जिउलियानो इसोन्टिना (ASU GI), ट्रिएस्टे, इटाली
email: maurizio.ruscio@asugi.sanita.fvg.it
8. इटालियन सोसाइटी अफ इन्भायरमेन्टल मेडिसिन (SIMA), मिलान, इटाली
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
9. वातावरण विज्ञान र नीति विभाग, मिलान विश्वविद्यालय, मिलान, इटाली
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
सम्बन्धित लेखक:
लियोनार्डो सेट्टी, Department of Industrial Chemistry, University of Bologna Viale del Risorgimento 4, 40136, Bologna, Italy; e-mail: leonardo.setti@unibo.it

सन्दर्भहरू
1. विश्व स्वास्थ्य संगठन, COVID-19 को कारण भाइरस को प्रसारण मोड: IPC सावधानी सिफारिसहरु को लागी प्रभाव, वैज्ञानिक संक्षिप्त;मा उपलब्ध छ: https://www.who.int/newsroom/commentaries/detail/modes-of-transmission-of-virus-causing-covid-19-implications-for-ipcprecaution-recommendations (२९ मार्च २०२०)
2. इटालियन स्वास्थ्य मन्त्रालय, दैनिक बुलेटिन इटालीमा कोविड-19 प्रकोप, http://www.salute.gov.it/imgs/C_17_notizie_4451_0_file.pdf मा उपलब्ध छ
3. EEA, युरोपेली पर्यावरण एजेन्सी, युरोपमा वायु गुणस्तर 2019 रिपोर्ट;नम्बर 10/2019;युरोपेली वातावरण एजेन्सी: कोपेनहेगन, डेनमार्क, यहाँ उपलब्ध छ: https://www.eea.europa.eu/publications/airquality-in-europe-2019
4. Xiao Wu, Rachel C. Nethery, M. Benjamin Sabath, Danielle Braun, Francesca Dominici, संयुक्त राज्य अमेरिकामा वायु प्रदूषण र COVID-19 मृत्युदर, यहाँ उपलब्ध छ: https://projects.iq.harvard.edu/ files/covid-pm/files/pm_and_covid_mortality.pdf
5. इटालियन सोसाइटी अफ इन्भाइरोमेन्टल मेडिसिन (SIMA), पोजिसन पेपर पार्टीक्युलेट मेटर र COVID-19,
यहाँ उपलब्ध छ: http://www.simaonlus.it/wpsima/wp-content/uploads/2020/03/COVID_19_positionpaper_ENG.pdf
6. Setti L., Passarini F., De Gennaro G., Barbieri P., Perrone MG, Piazzalunga A., Borelli M., Palmisani J., Di Gilio A, Piscitelli P, Miani A., त्यहाँ एक प्रशंसनीय भूमिका छ? उत्तरी इटालीमा COVID-19 को फैलावटमा कणहरूका लागि?, BMJ Rapid Responses, अप्रिल 8th 2020, यहाँ उपलब्ध छ: https://www.bmj.com/content/368/bmj.m1103/rapid-responses
7. Sedlmaier, N., Hoppenheidt, K., Krist, H., Lehmann, S., Lang, H., Buttner, M. जेनेरेशन अफ एभियन इन्फ्लुएन्जा भाइरस (AIV) दूषित मल फाइन पार्टिक्युलेट पदार्थ (PM2.5): जीनोम र संक्रामकता पत्ता लगाउने र इमिसनको गणना।पशु चिकित्सा माइक्रोबायोलोजी।139, 156-164 (2009)
8. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Schmitt, D., Win, H. एयरबोर्न ट्रान्समिशनले 2015 मा अत्यधिक रोगजनक एभियन इन्फ्लुएन्जा प्रकोप फैलाउनमा भूमिका खेलेको हुन सक्छ। संयुक्त राज्य अमेरिका।विज्ञान प्रतिनिधि 9, 11755। https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
9. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. पश्चिमी चीनमा दादुरा घटनाहरूमा धूलो घटनाहरूको प्रभावको लागि मूल्याङ्कन।वायुमण्डलीय वातावरण।१५७, १-९ (२०१७)
10. Sorensen, JH, Mackay, DKJ, Jensen, C. Ø., Donaldson, AI खुट्टा र मुख रोग भाइरस Epidemiol को वायुमण्डलीय फैलावटको भविष्यवाणी गर्न एक एकीकृत मोडेल।संक्रमित।, 124, 577-590 (2000)
11. ग्लोस्टेरा, जे., अलेक्जेन्डरसेन, एस. नयाँ दिशाहरू: खुट्टा र मुख रोग भाइरस वायुमण्डलीय वातावरणको एयरबोर्न ट्रान्समिशन, 38 (3), 503-505 (2004)
12. Reche, I., D'Orta, G., Mladenov, N., Winget, DM, Suttle, CA वायुमण्डलीय सीमा तह भन्दा माथि भाइरस र ब्याक्टेरिया को जम्मा दर।ISME जर्नल।१२, ११५४-११६२ (२०१८)
13. किन, एन., लिआंग, पी., वू, सी., वाङ, जी., जू, क्यू., Xiong, X., वाङ्ग, टी., जोल्फो, एम., सेगाटा, एन., किन, एच। ., नाइट, आर., गिल्बर्ट, JA, Zhu, TF एक मेगासिटीमा कणिक पदार्थसँग सम्बन्धित माइक्रोबायोमको दीर्घकालीन सर्वेक्षण।जीनोम जीवविज्ञान।२१, ५५ (२०२०)
14. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Schmitt, D., Win, H. एयरबोर्न ट्रान्समिशन हुन सक्छ
संयुक्त राज्य अमेरिका मा 2015 अत्यधिक रोगजनक एभियन इन्फ्लुएन्जा प्रकोप फैलाउन भूमिका खेलेको थियो।विज्ञान
प्रतिनिधि 9, 11755। https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
15. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. पश्चिमी चीनमा दादुरा घटनाहरूमा धूलो घटनाहरूको प्रभावको लागि मूल्याङ्कन।वायुमण्डलीय वातावरण।१५७, १-९ (२०१७)
16. Jiang, W., Laing, P., Wang, B., Fang, J., Lang, J., Tian, ​​G., Jiang, J., Zhu, TF अनुकूलित DNA निकासी र वायुजनित माइक्रोबियल समुदायहरूको मेटाजेनोमिक अनुक्रमण ।नाट।प्रोटोक।१०, ७६८-७७९ (२०१५)
17. Pan, M., Lednicky, JA, Wu, C.-Y., सङ्कलन, कण साइजिङ र वायुजनित भाइरसहरूको पहिचान।एप्लाइड माइक्रोबायोलोजीको जर्नल, 127, 1596-1611 (2019)
18. Zymoresearch Ldt, उत्पादन विवरण, यहाँ उपलब्ध छ: https://www.zymoresearch.com/products/quick-rnafecal-soil-microbe microprep-kit
19. Quantabio Ltd, उत्पादनको विवरण, यहाँ उपलब्ध छ: https://www.quantabio.com/qscript-xlt-1-steprt-qpcr-toughmix
20. Corman, VM, Landt, O., Kaiser, M., Molenkamp, ​​R., Meijer, A., Chu, DK, र Mulders, DG (2020)।
वास्तविक समय RT-PCR द्वारा 2019 उपन्यास कोरोनाभाइरस (2019-nCoV) को पहिचान।Eurosurveillance, 25(3), यहाँ उपलब्ध छ: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/

मूल: https://doi.org/10.1101/2020.04.15.20065995