SARS-CoV-2 virusi tufayli COVID-19 kasalligi deb nomlanuvchi ogʻir oʻtkir respirator sindrom nafas olish tomchilari va yaqin aloqalar orqali tarqalishi tan olingan.[1]COVID-19 yuki Lombardiya va Po vodiysida (Shimoliy Italiya)[2] juda ogʻir boʻlgan, bu hududda zarrachalar yuqori konsentratsiyali boʻlib, ular allaqachon inson salomatligiga salbiy taʼsir koʻrsatishi maʼlum.[3]12 aprel kuni Italiyada mavjud bo'lgan mintaqaviy ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, hozirda ijobiy odamlarning qariyb 30 foizi hali ham Lombardiyada istiqomat qiladi (agar epidemiya boshidan tasdiqlangan umumiy holatlar hisobga olinsa, taxminan 40%), undan keyin Emiliya Romagna (13,5%). , Piedmont (10,5%) va Veneto (10%).[2]Po vodiysining ushbu to'rtta mintaqasi Italiyada qayd etilgan jami o'limlarning 80 foizini va reanimatsiya bo'limlariga yotqizilganlarning 65 foizini tashkil qiladi.[2]
Garvard sog'liqni saqlash maktabi tomonidan olib borilgan tadqiqot, AQShda COVID-19 tufayli PM kontsentratsiyasining oshishi va o'lim darajasi o'rtasidagi bog'liqlikni tasdiqlagan ko'rinadi[4] Oldingi xabarlarda biz SARS-CoV-2 ehtimoli borligini taxmin qilgan edik. virus infektsiyaning tarqalishi paytida zarracha moddalarda (PM) mavjud bo'lishi mumkin, [5,6] allaqachon dalillarga muvofiq
boshqa viruslar uchun ham mavjud.[7-15] Biroq, havodagi PM bilan bog'liq mikrobioma muammosi, ayniqsa, shahar muhitida, ko'p darajada o'rganilmagan bo'lib qolmoqda [16] va hozirda hech kim maxsus maqsadli eksperimental tadqiqotlar o'tkazmagan. PMda SARS-CoV-2 mavjudligini tasdiqlash yoki istisno qilishda.
Bu erda biz Bergamo provinsiyasidagi sanoat maydonchasidan 21 fevraldan martgacha 3 haftalik vaqt davomida ikki xil havo namunasi oluvchi bilan to'plangan tashqi/havodagi PM10 ning 34 ta PM10 namunalarida o'tkazgan tahlillarning birinchi natijalarini taqdim etamiz. 13.
Pan va boshqalar tomonidan tasvirlangan metodologiyadan so'ng.2019 yilda (to'plash, zarrachalar hajmini aniqlash va havodagi viruslarni aniqlash uchun)[17] PM namunalari EN12341 mos yozuvlar usuliga mos keladigan past hajmli gravimetrik havo namunasi (23 soat davomida 38,3 l/min) yordamida kvarts tolasi filtrlarida to'plangan. : PM10 monitoringi uchun 2014 yil.Zarrachalar 99,9% tipik filtrlarga tutilganaerozolni ushlab turish, to'g'ri saqlanadi va Trieste universitetining Amaliy va qiyosiy genomika laboratoriyasiga yetkaziladi.Namunaning DNK polimerazalarining ingibitorlariga boy bo'lgan “ekologik” tabiatini hisobga olib, filtrlar turiga moslashtirilgan Quick RNK najasli tuproq mikroblari to'plamidan foydalanib, RNK ekstraktsiyasini davom ettirdik.[18]Yarim filtr yuqori tomoni ichkariga qaragan holda aylantirildi,5 ml polipropilen naychada, to'plamda taqdim etilgan boncuklar bilan birga.Dastlabki 1 ml lizisbuferdan biz taxminan 400 ul eritma olishga muvaffaq bo'ldik, keyin u standart protokollarda belgilangan tarzda qayta ishlandi, natijada 15 ul yakuniy elyuat paydo bo'ldi.Keyinchalik, SARS-CoV-2 testi uchun 5 ul ishlatilgan.Namunaning kelib chiqishini hisobga olgan holda, qScript XLT 1-Step RT-qPCR ToughMix ishlatilgan.[19]Amplifikatsiya tizimlari JSST veb-saytida chop etilgan Corman va boshqalar tomonidan ishlab chiqilgan protokol edi [20].
Sinov aniq zarracha moddalarda SARS-CoV-2 RNK mavjudligini tasdiqlash yoki istisno qilishga qaratilgan edi.Birinchi tahlil molekulyar marker sifatida "E geni" dan foydalanildi va 16 filtrdan 15 tasida ta'sirchan ijobiy natija berdi, hatto biz kutganimizdek, Ct 36-38 tsikl orasida bo'lsa ham.
Shundan so'ng, biz SARS-CoV-2 uchun juda xos bo'lgan molekulyar marker sifatida "RtDR geni" dan foydalanib, 6 ta ijobiy filtrda ("E gen" ga allaqachon ijobiy) tahlilni takrorladik - 5 ta muhim natijaga erishdik. pozitivlik;noto'g'ri pozitivlikni istisno qilish uchun nazorat testlari ham muvaffaqiyatli amalga oshirildi (1-rasm).
Namuna olish uchun mavjud bo'lgan kam materiallar tugashining oldini olish uchun qolgan olingan RNKlar mahalliy universitet kasalxonasiga (Italiya hukumati tomonidan SARS-CoV-2 diagnostik testlari uchun ruxsat berilgan klinik markazlardan biri) ikkinchi marta o'tkazish uchun yetkazildi. parallel ko'r sinov.Ushbu ikkinchi klinik laboratoriya E, N va RdRP genlari uchun 34 ta RNK ekstraktsiyasini sinovdan o'tkazdi, uchta marker genidan kamida bittasi uchun 7 ta ijobiy natijani xabar qildi, ijobiylik har uch marker uchun alohida tasdiqlangan (2-rasm).Namuna tabiatiga ko'ra va namuna olish klinik diagnostika maqsadida emas, balki atrof-muhitni ifloslantirish testlari uchun o'tkazilganligini hisobga olgan holda (shuningdek, filtrlar molekulyar genetik tahlildan o'tishdan oldin kamida to'rt hafta davomida saqlanganligini hisobga olgan holda)Italiya yopilishining natijasi), biz 8 ta filtrda yuqori o'ziga xos "RtDR geni" ni aniqlash orqali SARS-CoV-2 virusli RNK mavjudligini asosli ravishda isbotlaganimizni tasdiqlashimiz mumkin.Biroq, filtrlardan qo'shimcha materiallar yo'qligi sababli, biz bir vaqtning o'zida barcha 3 molekulyar marker uchun ijobiylikni ko'rsatish uchun etarli miqdordagi testlarni takrorlay olmadik.
Bu SARS-CoV-2 RNK tashqi zarrachalar ustida bo'lishi mumkinligi haqidagi birinchi dastlabki dalil bo'lib, atmosfera barqarorligi va PM ning yuqori kontsentratsiyasi sharoitida SARS-CoV-2 tashqi PM bilan klasterlarni yaratishi mumkinligini ko'rsatadi. ularning diffuziya koeffitsientini kamaytirish - atmosferada virusning chidamliligini oshirish.Ushbu dastlabki tasdiqning keyingi tasdiqlaridalillar davom etmoqda va SARS-CoV-2 ning hayotiyligi, shuningdek, zarrachalar bilan adsorbsiyalanganda uning virulentligi haqida real vaqt rejimida baholashni o'z ichiga olishi kerak.Hozirgi vaqtda PMda virus mavjudligi va COVID-19 epidemiyasining rivojlanishi o'rtasidagi bog'liqlik haqida hech qanday taxmin qilish mumkin emas.Maxsus hal qilinishi kerak bo'lgan boshqa masalalar, oxir-oqibat, PM ning o'rtacha kontsentratsiyasiyuqumli kasallikning potentsial "kuchaytiruvchi ta'siri" uchun zarur bo'lgan (agar PM virusli tomchilar yadrolari uchun "tashuvchi" bo'lishi mumkinligi tasdiqlansa) yoki hatto PM ning pastki chegaralarida minimal doza ta'siri natijasida immunizatsiyaning nazariy imkoniyati. .
1-rasm E (A) va RdRP genlarining (B) kuchaytirish egri chiziqlari: yashil chiziqlar sinovdan o'tgan filtrlarni ifodalaydi;kesishgan chiziqlarmos yozuvlar filtri ekstraktsiyalarini ifodalaydi;qizil chiziqlar ijobiy namunalarning kuchayishini anglatadi.
2-rasm.Barcha 34 PM10 namunasi uchun olingan E, N va RdRP genlari uchun ijobiy natijalar (X bilan belgilangan)filtrlar ikkinchi parallel tahlillarda sinovdan o'tkazildi.
Leonardo Setti1, Fabritsio Passarini2, Janluidji De Gennaro3, Perluidji Barbieri4, Mariya Grazia Perrone5, Massimo Borelli6, Jolanda Palmisani3, Alessia Di Gilio3, Valentina Torboli6, Alberto Pallavicini6, Mauritsio Alessiro Pissi89,
1. Sanoat kimyosi fakulteti, Boloniya universiteti, Viale del Risorgimento – 4, I-40136, Boloniya, Italiya
e-mail: leonardo.setti@unibo.it
2. “Qayta tiklanadigan manbalar, atrof-muhit, ko‘k o‘sish, energiya” Idoralararo sanoat tadqiqotlari markazi
University of Bologna, Rimini, Italy e-mail: fabrizio.passarini@unibo.it
3. Bari shahridagi “Aldo Moro” universiteti, Biologiya fakulteti, Bari, Italiya
e-mail: gianluigi.degennaro@uniba.it; alessia.digilio@uniba.it; jolanda.palmisani@uniba.it
4. Kimyo va farmatsevtika fanlari fakulteti, Triest universiteti, Trieste, Italiya
e-mail: barbierp@units.it
5. Atrof-muhitni o'rganish bo'limi, TCR TECORA, Milan, Italiya
e-mail: mariagrazia.perrone@tcrtecora.com
6. Hayot fanlari fakulteti – Trieste universiteti, Trieste, Italiya
e-mail: borelli@units.it; torboli@units.it; pallavic@units.it
7. Giuliano Isontina universiteti kasalxonasi laboratoriya tibbiyoti boʻlimi (ASU GI), Triest, Italiya
email: maurizio.ruscio@asugi.sanita.fvg.it
8. Italiya atrof-muhit tibbiyoti jamiyati (SIMA), Milan, Italiya
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
9. Milan universiteti, Atrof-muhit fanlari va siyosat bo'limi, Milan, Italiya
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
Muallif:
Leonardo Setti, Department of Industrial Chemistry, University of Bologna Viale del Risorgimento 4, 40136, Bologna, Italy; e-mail: leonardo.setti@unibo.it
Ma'lumotnomalar
1. Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti, COVID-19 qo'zg'atuvchi virusning tarqalish usullari: IPC ehtiyot bo'lish tavsiyalariga ta'siri, Ilmiy qisqacha ma'lumot;Bu yerda mavjud: https://www.who.int/newsroom/commentaries/detail/modes-of-transmission-of-virus-causing-covid-19-implications-for-ipcprecaution-recommendations (29-mart, 2020-yil)
2. Italiya Sog'liqni saqlash vazirligi, Italiyada Covid-19 epidemiyasining kunlik byulleteni, http://www.salute.gov.it/imgs/C_17_notizie_4451_0_file.pdf manzilida mavjud
3. EEA, Yevropa atrof-muhit agentligi, Yevropada havo sifati 2019 yilgi hisobot;№ 10/2019;Yevropa atrof-muhit agentligi: Kopengagen, Daniya, mavjud: https://www.eea.europa.eu/publications/airquality-in-europe-2019
4. Xiao Vu, Reychel C. Nethery, M. Benjamin Sabath, Danielle Braun, Francesca Dominici, Exposure to obflution and COVID-19 in United States, on https://projects.iq.harvard.edu/ files/covid-pm/files/pm_and_covid_mortality.pdf
5. Italiya Ekologik Tibbiyot Jamiyati (SIMA), Position Paper Particulate Matter va COVID-19,
mavjud: http://www.simaonlus.it/wpsima/wp-content/uploads/2020/03/COVID_19_positionpaper_ENG.pdf
6. Setti L., Passarini F., De Gennaro G., Barbieri P., Perrone MG, Piazzalunga A., Borelli M., Palmisani J., Di Gilio A, Piscitelli P, Miani A., Maqsadli rol bormi? Shimoliy Italiyada COVID-19 tarqalishidagi zarracha moddalar uchun?, BMJ Rapid Responses, 2020-yil 8-aprel, quyidagi manzilda mavjud: https://www.bmj.com/content/368/bmj.m1103/rapid-responses
7. Sedlmaier, N., Hoppenheidt, K., Krist, H., Lehmann, S., Lang, H., Buttner, M. Parranda grippi virusi (AIV) ning najasli mayda zarrachalar (PM2.5) bilan ifloslangan avlodi: genom va infektsiyani aniqlash va immissiyani hisoblash.Veterinariya mikrobiologiyasi.139, 156-164 (2009)
8. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Schmitt, D., Win, H. Havo orqali yuqish 2015-yilda parranda grippining yuqori patogenli tarqalishida rol o'ynagan bo'lishi mumkin. Qo'shma Shtatlar.Sci Rep. 9, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
9. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. G'arbiy Xitoyda qizamiq kasalligiga chang hodisalarining ta'sirini baholash.Atmosfera muhiti.157, 1-9 (2017)
10. Sorensen, JH, Mackay, DKJ, Jensen, C. Ø., Donaldson, AI. Oyoq va og'iz kasalligi virusi Epidemiolning atmosfera tarqalishini bashorat qilish uchun integratsiyalashgan model.Infect., 124, 577–590 (2000)
11. Glostera, J., Alexandersen, S. Yangi yo'nalishlar: Oyoq va og'iz kasalligi virusining havo orqali tarqalishi, 38 (3), 503-505 (2004)
12. Reche, I., D'Orta, G., Mladenov, N., Winget, DM, Suttle, CA Atmosfera chegara qatlami ustida viruslar va bakteriyalarning cho'kish tezligi.ISME jurnali.12, 1154-1162 (2018)
13. Qin, N., Liang, P., Vu, C., Vang, G., Xu, Q., Xiong, X., Vang, T., Zolfo, M., Segata, N., Qin, H. ., Knight, R., Gilbert, JA, Zhu, TF Megapolisdagi zarrachalar bilan bog'liq bo'lgan mikrobiomaning uzunlamasına tadqiqoti.Genom biologiyasi.21, 55 (2020)
14. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Shmitt, D., Win, H. Havo orqali uzatilishi mumkin.
Qo'shma Shtatlarda 2015 yilda yuqori patogenli parranda grippi tarqalishida rol o'ynadi.Sci
Rep. 9, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
15. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. G'arbiy Xitoyda qizamiq kasalligiga chang hodisalarining ta'sirini baholash.Atmosfera muhiti.157, 1-9 (2017)
16. Jiang, V., Laing, P., Vang, B., Fang, J., Lang, J., Tian, G., Jiang, J., Zhu, TF Optimallashtirilgan DNK ekstraktsiyasi va havodagi mikrobial jamoalarning metagenomik ketma-ketligi. .Nat.Protok.10, 768-779 (2015)
17. Pan, M., Lednicky, JA, Wu, C.-Y., To'plash, zarracha o'lchamlari va havodagi viruslarni aniqlash.Amaliy mikrobiologiya jurnali, 127, 1596-1611 (2019)
18. Zymoresearch Ldt, mahsulot tavsifi, quyidagi manzilda mavjud: https://www.zymoresearch.com/products/quick-rnafecal-soil-microbe microprep-kit
19. Quantabio Ltd, mahsulot tavsifi: https://www.quantabio.com/qscript-xlt-1-steprt-qpcr-toughmix
20. Corman, VM, Landt, O., Kaiser, M., Molenkamp, R., Meijer, A., Chu, DK, & Mulders, DG (2020).
Real vaqt rejimida RT-PCR yordamida 2019-yilgi yangi koronavirusni (2019-nCoV) aniqlash.Eurosurveillance, 25(3), mavjud:.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/
Asl: https://doi.org/10.1101/2020.04.15.20065995
Yuborilgan vaqt: 2020-yil 18-aprel