SARS-Cov-2 RNA air a lorg air cùis gràineach de Bergamo ann an ceann a tuath na h-Eadailt: A ’chiad fhianais tòiseachaidh

Thathas ag aithneachadh gu bheil fìor dhroch syndrome analach ris an canar galar COVID-19 - mar thoradh air bhìoras SARS-CoV-2 - a’ sgaoileadh tro boinneagan analach agus ceanglaichean dlùth.[1]Bha eallach COVID-19 gu math dona ann an Lombardy agus Po Valley (An Eadailt a Tuath), [2] sgìre air a chomharrachadh le dùmhlachdan àrd de stuth gràineach, a tha aithnichte mar-thà a bheir droch bhuaidh air slàinte dhaoine.[3]Tha figearan roinneil a tha rim faighinn airson an Eadailt aig ceann-latha 12 Giblean a’ sealltainn gu bheil timcheall air 30% de dhaoine a tha deimhinneach an-dràsta fhathast a’ fuireach ann an Lombardy (timcheall air 40% ma thathar a’ beachdachadh air na cùisean iomlan a chaidh a dhearbhadh bho thoiseach an tinneas tuiteamach), air a leantainn le Emilia Romagna (13.5%) , Piedmont (10.5%), agus Veneto (10%).[2]Tha na ceithir roinnean sin de Ghleann Po a’ dèanamh suas 80% de bhàsan iomlan a chaidh a chlàradh san Eadailt agus 65% de dh’ inntrigidhean Aonadan Cùram Dian.[2]

Tha e coltach gu bheil rannsachadh a rinn Sgoil Slàinte Poblach Harvard a’ dearbhadh ceangal eadar àrdachadh ann an dùmhlachdan PM agus ìrean bàsmhorachd mar thoradh air COVID-19 anns na SA[4] Ann an conaltradh roimhe, tha sinn air beachd a ghabhail air comasachd gun robh SARS-CoV-2 dh’ fhaodadh bhìoras a bhith an làthair air stuth gràineach (PM) aig àm sgaoileadh a’ ghalair, [5,6] gu co-chòrdail ri fianais mu thràth
ri fhaighinn airson bhìorasan eile.[7-15] Ach, chan eil mòran rannsachaidh fhathast air a’ cheist mu mhiocrobiome co-cheangailte ri PM san adhar, gu sònraichte ann an àrainneachdan bailteil,[16] agus – aig an àm seo – chan eil duine fhathast air sgrùdaidhean deuchainneach a dhèanamh a tha ag amas gu sònraichte. le bhith a’ dearbhadh no a’ dùnadh a-mach làthaireachd SARS-CoV-2 air PM.
An seo, bidh sinn a’ taisbeanadh a’ chiad thoraidhean de na mion-sgrùdaidhean a rinn sinn air sampallan 34 PM10 de PM10 a-muigh / adhair bho làrach gnìomhachais ann an Roinn Bergamo, air an cruinneachadh le dà samplers adhair eadar-dhealaichte thar ùine leantainneach de 3 seachdainean, bho 21 Gearran gu Màrt. 13mh.
A’ leantainn a’ mhodh-obrach a mhìnich Pan et al.ann an 2019 (airson cruinneachadh, meud mìrean agus lorg bhìorasan san adhar),[17] Chaidh sampallan PM a chruinneachadh air sìoltachain snàithleach quartz le bhith a’ cleachdadh sampladair èadhair gravimetric meud ìosal (38.3 l / min airson 23 h), a rèir modh iomraidh EN12341 :2014 airson sgrùdadh PM10.Chaidh stuth gràineach a ghlacadh air sìoltachain le 99.9% àbhaisteachgleidheadh ​​​​aerosol, air a stòradh gu ceart agus air a lìbhrigeadh gu obair-lann Genomics Gnìomhaichte agus Coimeasach Oilthigh Trieste.Air sgàth nàdar “àrainneachd” an t-sampall, a rèir coltais beairteach ann an luchd-bacadh DNA polymerases, chaidh sinn air adhart le bhith a’ toirt a-mach RNA le bhith a’ cleachdadh pasgan microbe talmhainn fecal Quick RNA a chaidh atharrachadh a rèir an seòrsa sìoltachain.[18]Chaidh leth sìoltachan a roiligeadh, leis an taobh àrd a’ coimhead a-staigh,ann an tiùb polypropylene 5 ml, còmhla ris na grìogagan a tha air an toirt seachad sa phiseag.Bhon chiad 1 ml de lysisbuffer, bha e comasach dhuinn timcheall air 400 ul de fhuasgladh fhaighinn, a chaidh an uairsin a ghiullachd mar a chaidh a mhìneachadh leis na protocolaidhean àbhaisteach, agus mar thoradh air sin thàinig eluate deireannach de 15 ul.Às deidh sin, chaidh 5 ul a chleachdadh airson deuchainn SARS-CoV-2.Leis cò às a thàinig an sampall, chaidh an qScript XLT 1-Step RT-qPCR ToughMix a chleachdadh.[19]B’ e na siostaman leudachaidh an fheadhainn anns a’ phròtacal a chaidh a leasachadh le Corman et al, a chaidh fhoillseachadh air làrach-lìn WHO [20].
Bha an deuchainn ag amas gu sònraichte air a bhith a’ dearbhadh no a’ dùnadh a-mach làthaireachd RNA SARS-CoV-2 air stuth gràin.Chleachd a’ chiad sgrùdadh an “E gene” mar chomharradh moileciuil agus thug iad a-mach deagh thoradh air 15 a-mach à sìoltachain 16 eadhon ged a bhiodh, mar a bhiodh dùil againn, an Ct eadar 36-38 cearcallan.
Às deidh sin, tha sinn air an anailis air 6 de na sìoltachain adhartach ath-aithris (mar-thà dearbhach do “E gene”) le bhith a’ cleachdadh an “gine RtDR” mar chomharradh moileciuil - a tha gu math sònraichte airson SARS-CoV-2 - a’ ruighinn 5 toraidhean cudromach deimhinneach;chaidh deuchainnean smachd a dhèanamh gu soirbheachail gus casg a chur air dearbhachd ceàrr (Fig. 1).
Gus nach tèid an stuth samplachaidh gann a bha ri fhaighinn a sheachnadh, chaidh na RNAn a chaidh a thoirt a-mach a lìbhrigeadh don Ospadal Oilthigh ionadail (aon de na h-ionadan clionaigeach a tha ùghdarraichte le Riaghaltas na h-Eadailt airson deuchainnean breithneachaidh SARS-CoV-2), gus diog a dhèanamh. deuchainn dall co-shìnte.Rinn an dàrna obair-lann clionaigeach seo deuchainn air 34 às-tharraing RNA airson na ginean E, N agus RdRP, ag aithris 7 toraidhean dearbhach airson co-dhiù aon de na trì ginean comharrachaidh, le dearbhachd air a dhearbhadh air leth airson na trì comharran (Fig. 2).Air sgàth nàdar an t-sampall, agus leis nach deach an samplachadh a dhèanamh airson adhbharan breithneachaidh clionaigeach ach airson deuchainnean truailleadh àrainneachd (a’ gabhail a-steach cuideachd gun deach sìoltachain a stòradh airson co-dhiù ceithir seachdainean mus deach iad tro mhion-sgrùdaidhean ginteil moileciuil, marmar thoradh air dùnadh na h-Eadailt), is urrainn dhuinn dearbhadh gu bheil sinn air sealltainn gu reusanta gu bheil SARS-CoV-2 RNA viral le bhith a’ lorg “gine RtDR” air leth sònraichte air sìoltachain 8.Ach, air sgàth dìth stuthan a bharrachd bho na sìoltachain, cha b’ urrainn dhuinn àireamh gu leòr de dheuchainnean a dhèanamh a-rithist gus dearbhadh a dhèanamh air na 3 comharran moileciuil aig an aon àm.
Is e seo a’ chiad fhianais tòiseachaidh gum faod SARS-CoV-2 RNA a bhith an làthair air stuth gràineach a-muigh, mar sin a’ moladh, ann an suidheachaidhean seasmhachd àile agus dùmhlachd àrd de PM, gum faodadh SARS-CoV-2 cruinneachaidhean a chruthachadh le PM a-muigh agus - le a’ lughdachadh an co-èifeachd sgaoilidh aca - ag àrdachadh seasmhachd a’ bhìoras san àile.Dearbhaidhean a bharrachd air an ro-ràdh seotha fianais a’ dol air adhart, agus bu chòir dha a bhith a’ toirt a-steach measadh fìor-ùine mu spionnadh SARS-CoV-2 a bharrachd air cho làidir sa tha e nuair a thèid a shanasachadh air stuth gràineach.Aig an àm seo, chan urrainnear barailean sam bith a dhèanamh a thaobh a’ cho-dhàimh eadar làthaireachd a’ bhìoras air PM agus adhartas ar-a-mach COVID-19.Is e cùisean eile ris am feumar dèiligeadh gu sònraichte na dùmhlachdan cuibheasach de PM aig a’ cheann thalla dh’ fheumar airson “buaidh àrdachadh” a dh’ fhaodadh a bhith aig an contagion (air eagal ‘s gun tèid a dhearbhadh gum faodadh PM a bhith na“ neach-giùlain ”airson na niuclasan droplet viral), no eadhon an comas teòiridheach air banachdach mar thoradh air glè bheag de nochdadh dòs aig ìrean nas ìsle de PM .

Fig.1 Cromagan leudachaidh de ghinean E (A) agus RdRP (B): tha loidhnichean uaine a’ riochdachadh sìoltachain deuchainn;loidhnichean tarsainna’ riochdachadh às-tharraing sìoltachain iomraidh;tha loidhnichean dearga a’ riochdachadh leudachadh air na sampallan adhartach.
Fig.1

Fig.2.Toraidhean adhartach (comharraichte le X) airson ginean E, N agus RdRP air fhaighinn airson an sampall 34 PM10 gu lèirsìoltachain air an deuchainn anns an dàrna mion-sgrùdadh co-shìnte.
Fig.2Leonardo Setti1, Fabrizio Passarini2, Gianluigi De Gennaro3, Pierluigi Barbieri4, Maria Grazia Perrone5, Massimo Borelli6, Jolanda Palmisani3, Alessia Di Gilio3, Valentina Torboli6, Alberto Pallavicini6, Maurizio Ruscio7,, Maurizio Ruscio7, Piscitdrolian8
1. Roinn Ceimigeachd Gnìomhachais, Oilthigh Bologna, Viale del Risorgimento - 4, I-40136, Bologna, an Eadailt
e-mail: leonardo.setti@unibo.it
2. Ionad Eadar-roinneil airson Rannsachadh Gnìomhachais “Stòran Ath-nuadhachail, Àrainneachd, Fàs Gorm, Lùth”,
University of Bologna, Rimini, Italy e-mail: fabrizio.passarini@unibo.it
3. Roinn Bith-eòlas, Oilthigh "Aldo Moro" ann am Bari, Bari, an Eadailt
e-mail: gianluigi.degennaro@uniba.it; alessia.digilio@uniba.it; jolanda.palmisani@uniba.it
4. Roinn nan Saidheansan Ceimigeach agus Cungaidh-leigheis, Oilthigh Trieste, Trieste, an Eadailt
e-mail: barbierp@units.it
5. Roinn Rannsachadh Àrainneachd, TCR TECORA, Milan, an Eadailt
e-mail: mariagrazia.perrone@tcrtecora.com
6. Roinn nan Saidheansan Beatha - Oilthigh Trieste, Trieste, an Eadailt
e-mail: borelli@units.it; torboli@units.it; pallavic@units.it
7. Roinn Leigheas Obair-lann, Ospadal an Oilthigh Giuliano Isontina (ASU GI), Trieste, an Eadailt
email: maurizio.ruscio@asugi.sanita.fvg.it
8. Comann Eadailteach Leigheas Àrainneachd (SIMA), Milan, an Eadailt
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
9. Roinn Saidheans Àrainneachd agus Poicy, Oilthigh Milan, Milan, an Eadailt
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
Ùghdar Co-fhreagarrach:
Leonardo Setti, Department of Industrial Chemistry, University of Bologna Viale del Risorgimento 4, 40136, Bologna, Italy; e-mail: leonardo.setti@unibo.it

Iomraidhean
1. Buidheann Slàinte na Cruinne, Modhan tar-chuir bhìoras ag adhbhrachadh COVID-19: buaidh air molaidhean dìon IPC, Geàrr-chunntas saidheansail;ri fhaighinn aig: https://www.who.int/newsroom/commentaries/detail/modes-of-transmission-of-virus-causing-covid-19-implications-for-ipcprecaution-recommendations (29 Màrt 2020)
2. Ministreachd Slàinte na h-Eadailt, iris làitheil ar-a-mach Covid-19 san Eadailt, ri fhaighinn aig http://www.salute.gov.it/imgs/C_17_notizie_4451_0_file.pdf
3. EEA, Buidheann Àrainneachd na h-Eòrpa, Aithisg Càileachd Adhair san Roinn Eòrpa 2019;Chan eil 10/2019;Buidheann Àrainneachd na h-Eòrpa: Copenhagen, an Danmhairg, ri fhaighinn aig: https://www.eea.europa.eu/publications/airquality-in-europe-2019
4. Xiao Wu, Rachel C. Nethery, M. Benjamin Sabath, Danielle Braun, Francesca Dominici, Taisbeanadh air truailleadh èadhair agus bàsmhorachd COVID-19 anns na Stàitean Aonaichte, ri fhaighinn aig: https://projects.iq.harvard.edu/ faidhlichean/covid-pm/files/pm_and_covid_mortality.pdf
5. Comann Eadailteach Leigheas Àrainneachd (SIMA), Pàipear Dreuchd Cùis Pàirteach agus COVID-19,
ri fhaighinn aig: http://www.simaonlus.it/wpsima/wp-content/uploads/2020/03/COVID_19_positionpaper_ENG.pdf
6. Setti L., Passarini F., De Gennaro G., Barbieri P., Perrone MG, Piazzalunga A., Borelli M., Palmisani J., Di Gilio A, Piscitelli P, Miani A., A bheil Dleastanas So-chreidsinneach ann airson Cùis Particulate ann an sgaoileadh COVID-19 ann an ceann a tuath na h-Eadailt?, BMJ Rapid Responses, 8 Giblean 2020, ri fhaighinn aig: https://www.bmj.com/content/368/bmj.m1103/rapid-responses
7. Sedlmaier, N., Hoppenheidt, K., Krist, H., Lehmann, S., Lang, H., Buttner, M. Generation of avian influenza virus (AIV) air a thruailleadh stuth gràineil fecal (PM2.5): lorg genoma agus gabhaltachd agus àireamhachadh in-ghabhail.Microbiology lighiche-sprèidh.139, 156-164 (2009)
8. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Schmitt, D., Win, H. Is dòcha gu robh pàirt aig tar-chuir adhair ann an sgaoileadh 2015 de chnatan-mòr eòin pathogenic anns an dùthaich. Na Stàitean Aonaichte.Sci Rep. 9, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
9. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. Measadh airson buaidh tachartasan duslach air tricead a’ ghriùthlach ann an taobh an iar Shìona.Àrainneachd Atmospheric.157, 1-9 (2017)
10. Sorensen, JH, MacAoidh, DKJ, Jensen, C. Ø., Donaldson, AI Modail amalaichte gus ro-innse sgaoileadh àile de bhìoras galar cas-is-beul Epidemiol.Infect., 124, 577–590 (2000)
11. Glostera, J., Alexandersen, S. Stiùiridhean Ùra: Tar-chur Àrainneachd Atmospheric Virus Galar Foot-and-Beul, 38 (3), 503-505 (2004)
12. Reche, I., D'Orta, G., Mladenov, N., Winget, DM, Suttle, CA Ìrean tasgaidh bhìorasan agus bacteria os cionn ìre crìche an àile.Iris ISME.12, 1154-1162 (2018)
13. Qin, N., Liang, P., Wu, C., Wang, G., Xu, Q., Xiong, X., Wang, T., Zolfo, M., Segata, N., Qin, H ., Knight, R., Gilbert, JA, Zhu, TF Sgrùdadh fad-ùine air microbiome co-cheangailte ri stuth gràineach ann am megacity.Genome bith-eòlas.21, 55 (2020)
14. Zhao, Y., Richardson, B., Takle, E., Chai, L., Schmitt, D., Win, H. Faodaidh tar-chuir adhair
Bha pàirt aige ann an sgaoileadh 2015 de chnatan-mòr eòin fìor pathogenic anns na Stàitean Aonaichte.Sci
Rep. 9, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
15. Ma, Y., Zhou, J., Yang, S., Zhao, Y., Zheng, X. Measadh airson buaidh tachartasan duslach air tricead a’ ghriùthlach ann an taobh an iar Shìona.Àrainneachd Atmospheric.157, 1-9 (2017)
16. Jiang, W., Laing, P., Wang, B., Fang, J., Lang, J., Tian, ​​G., Jiang, J., Zhu, TF às-tharraing DNA as fheàrr agus seicheamh metagenomic de choimhearsnachdan microbial adhair .Nat.Pròtac.10, 768-779 (2015)
17. Pan, M., Lednicky, JA, Wu, C.-Y., Cruinneachadh, meud mìrean agus lorg bhìorasan adhair.Iris Microbio-eòlas Gnìomhaichte, 127, 1596-1611 (2019)
18. Zymoresearch Ldt, tuairisgeul toraidh, ri fhaighinn aig: https://www.zymoresearch.com/products/quick-rnafecal-soil-microbe microprep-kit
19. Quantabio Ltd, tuairisgeul air an toradh, ri fhaighinn aig: https://www.quantabio.com/qscript-xlt-1-steprt-qpcr-toughmix
20. Corman, VM, Landt, O., Kaiser, M., Molenkamp, ​​R., Meijer, A., Chu, DK, & Mulders, DG (2020).
A’ lorg coronavirus nobhail 2019 (2019-nCoV) le RT-PCR fìor-ùine.Eurosurveillance, 25(3), ri fhaighinn aig: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/

Nochd an artaigil an toiseach air https://doi.org/10.1101/2020.04.15.20065995


Ùine puist: Giblean-18-2020